关键词：蛋白质 检测方法 检测原理
提交人：孙湾 提交时间：2021年10月8日
蛋白质的测定主要分为两类，一类是利用蛋白质的共性即含氮量、肽键和折射率等测定蛋白质含量；一类是利用蛋白质中的氨基酸残基、酸性和碱性基团以及芳香基团等测定蛋白质含量。同时蛋白质的检测也分为定性测定和定量测定。
- 蛋白质定性测定
1.蛋白质的一般显色反应：电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变色。
2.复合蛋白质的显色反应：糖蛋白的显色
脂蛋白的显色
- 蛋白质的定量测定
1.凯氏定氮法
样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。用H3BO3吸收后再以标准HCl溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。也可以用过量的标准H2SO4或标准HCl溶液吸收后再以标准NaOH滴定过量的酸。
2.双缩脲法
当脲被小心地加热至150～160℃时，可由两个分子间脱去一个氨分子而生成双缩脲，其与碱及少量硫酸铜溶液作用生成紫红色的配合物，此反应称为双缩脲反应
蛋白质分子中肽键（—CO—NH—）与双缩脲结构相似，也能呈现此反应而生成紫红色配合物，在一定条件下其颜色深浅与蛋白质含量成正比，用吸收光度法来测定蛋白质含量，最大吸收波长为560nm。
3.紫外分光光度法
试样与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。在 pH=4.8 的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，铵与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的化合物。在波长 400nm 处测定吸光度，与标准系列比较定量，结果乘以蛋白质系数，即为蛋白质含量。
4.染料结合法
在特定的条件下，蛋白质可与某些染料定量的反应生成沉淀，用分光光度计测定沉淀反应完全后剩余的染料量可计算出反应消耗的染料量，进而求得样品中蛋白质的含量。
5.水杨酸比色法
样品中的蛋白质经硫酸消化而转化成铵盐溶液后，在一定的酸度和温度条件下可与水杨酸和次氯酸钠作用生成蓝色化合物，在660nm处比色测定，求出样品的含氮量，进而计算出蛋白质的含量。
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